RESUMO
ABSTRACT Aim: This study evaluated cytotoxicity and antioxidant gene expression of resin cements on human gingival fibroblasts (hGF). Materials and Method: RelyX Ultimate™(RXU), Variolink™II(VLII), and RelyXU200™(RXU200) resin cements were incubated with culture medium for 24 h to obtain eluates. Then, the eluates were applied over hGF to assess cell viability at 24 h, 48 h, and 72 h and antioxidant gene expression at 24 h. hGF cultures non-exposed to the eluates were used as Control. Data were submitted to ANOVA and Bonferroni tests (α≤0.05). Results: RXU and RXU200 reduced the number of viable cells in 24 h. Longer exposure to cement extracts caused cell death. Gene expression showed peroxiredoxin 1 (PRDX1) induction by all resin cement types, and superoxide dismutase 1 (SOD1) induction by RXU200 and VLII. Moreover, RXU200 induced not only PRDX1 and SOD1, but also glutathione peroxidase 1 (GPX1), catalase (CAT), and glutathione synthetase (GSS). Conclusions: All resin cements showed toxicity, and induced antioxidant genes in hGF. Antioxidant gene induction is at least partly associated with cytotoxicity of tested cements to oxidative stress experience.
RESUMO Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar a toxicidade dos cimentos resinosos Rely X Ultimate 2, Rely X U200 e Variolink II, bem como sua influência na expressão de genes antioxidantes em fibroblastos gengivais humanos. Materiais e Método: Corpos de prova de cada cimento foram colocados em meio de cultura por 24 h e os extratos correspondentes foram aplicados aos fibroblastos. A viabilidade celular foi avaliada após 24, 48 e 72 h de exposição pelo ensaio de exclusão do azul de tripano e MTT. A expressão gênica foi avaliada por PCR quantitativo após 24 h de exposição aos extratos. Estes parâmetros foram comparados aos das células não expostas aos cimentos. Os dados foram submetidos ao teste ANOVA, seguido pelo pós-teste de Bonferroni (a≤0.05). Resultados: Os resultados demonstraram que todos os cimentos promoveram redução do número de células viáveis e da atividade mitocondrial nos períodos de 48 e de 72 h (p < 0,01), sendo que o Variolink II apresentou o menor efeito e os cimentos Rely X Ultimate e Rely X U200 promoveram similarmente os maiores efeitos. A análise de expressão gênica evidenciou influência significativa em todos os cimentos avaliados sobre os níveis de transcritos de PRDX1, SOD1, GPX1 e GSS (p> 0,05), com um aumento considerável no Rely X U200. Conclusão: A indução de genes antioxidantes está, pelo menos em parte, associada à citotoxicidade dos cimentos testados para a experiência de estresse oxidativo.
RESUMO
ABSTRACT Melatonin (MLT) is a potential signaling molecule in the homeostasis of bone metabolism and may be an important mediator of bone formation and stimulation. The aim of this in vitro study was to evaluate the effect of MLT on the viability, mRNA/protein expression and mineralization of pre-osteoblastic cells. The concentrations 5, 2.5, 1, 0.1 and 0.01 mM MLT were tested on pre-osteoblastic cells (MC3T3) compared to control (no MLT), evaluating proliferation and cell viability (C50), gene expression (RT-PCR) and secretion (ELISA) of COL-I and OPN at 24h, 48h and 72h, and the formation of mineral nodules (alizarin red and fast red) after 10 days of treatment. MLT at 5 and 2.5 mM proved to be cytotoxic (C50), so only 0.01, 0.1 and 1 mM were used for the subsequent analyses. OPN mRNA expression increased with MLT at 0.1 mM - 1 mM, which was followed by increased secretion of OPN both at 24h and 72h compared to the remaining groups (p <0.05). COL-I mRNA and COL-1 secretion followed the same pattern as OPN at 0.1 mM MLT at 72h of treatment (p <0.05). Regarding mineralization, all MLT doses (except 1mM) caused an increase (p <0.05) in the formation of mineral nodules compared to the control. Melatonin at 0.01mM - 1mM had a stimulatory effect on osteoblasts by upregulating COL-I and OPN expression/ secretion and mineralization, thereby fostering osteogenesis.
RESUMO A melatonina (MLT) é uma molécula potencial de sinalização na homeostase do metabolismo ósseo e pode ser um importante mediador da formação e estimulação óssea. O objetivo deste estudo in vitro foi avaliar o efeito da MLT na viabilidade, na expressão do mRNA da proteína e mineralização de células préosteoblásticas. As concentrações de MLT 5, 2,5, 1, 0,1 e 0,01 mM foram testadas em células pré-osteoblásticas da linhagem MC3T3 em comparação ao controle (sem MLT), avaliando a proliferação e a viabilidade celular (C50), expressão gênica (rtPCR) e secreção (Elisa) de Colágeno tipo 1 (COL-I) e osteopontina (OPN) às 24, 48 e 72 horas, além da formação de nódulos minerais por meio do teste vermelho de Alizarina fast red após 10 dias de tratamento. MLT a 5 e 2,5 mM provou ser tóxico (C50). Portanto, as concentrações de 0,01, 0,1 e 1 mM foram utilizadas para as análises subsequentes. A expressão do mRNA da OPN aumentou com MLT a 0,1 mM-1mM, seguida pela secreção aumentada de OPN às 24 e 72 horas em comparação aos demais grupos (p<0,05). O mRNA de COL-I e a secreção de COL-I seguiram o mesmo padrão do OPN a 0,1 mM de MLT em 72 horas de tratamento (p<0,05). Em relação à mineralização, todas as doses de MLT (exceto 1mM) causaram aumento (p<0,05) na formação de nódulos minerais em comparação ao controle. A MLT na concentração entre 0,01mM a 1 mM teve um efeito estimulador sobre os osteoblastos, ao regular positivamente a expressão e secreção de COL-I e OPN, além da mineralização, favorecendo a osteogênese.
Assuntos
Humanos , Osteoblastos/efeitos dos fármacos , Osteogênese/efeitos dos fármacos , Osteogênese/genética , Fragmentos de Peptídeos/metabolismo , Diferenciação Celular/efeitos dos fármacos , Diferenciação Celular/genética , Metaloproteinase 2 da Matriz/metabolismo , Osteopontina/metabolismo , Melatonina/farmacologia , Osteoblastos/metabolismo , Fragmentos de Peptídeos/genética , RNA Mensageiro/genética , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Expressão Gênica , Regulação da Expressão Gênica no Desenvolvimento/efeitos dos fármacos , Metaloproteinase 2 da Matriz/genética , Proliferação de Células/efeitos dos fármacos , Proliferação de Células/genética , Osteopontina/genética , Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo RealRESUMO
Abstract Tapered implant connections have gained wide popularity for being more resistant to fatigue and for promoting a better seal against bacterial infiltration than conventional connections. The aim of this study was to evaluate the bacterial seal at the implant-abutment interface using two Morse taper implant models, by in vitro microbiological analysis. Eleven non-indexed and 11 indexed abutments were selected and connected to their respective implants with a 20 N torque, according to manufacturer's recommendation. Microbiological analysis was carried out using colonies of Escherichia coli transported directly from a culture dish to the prosthetic component. For control, one non-contaminated abutment-implant set from each group (negative control) and one contaminated implant with no abutment (positive control) were used. The specimens were immersed in BHI broth and maintained in an incubator at 37 °C for 14 days to assess the development of bacterial contamination. The results revealed that 36.4% (n=4) of the indexed components and 90.9% (n=10) of the non-indexed components allowed bacterial leakage, with significant difference between groups (p=0.0237). In conclusion, both tapered components failed to provide adequate sealing to bacterial leakage, although the indexed type components showed a superior seal compared with non-indexed components.
Resumo Conexões de implantes cônicos cresceram em popularidade por serem mais resistentes à fadiga e por promover uma melhor vedação contra infiltração bacteriana do que as conexões convencionais. O objetivo deste estudo foi avaliar o selamento bacteriano na interface implante-pilar utilizando dois modelos de implantes cone Morse, por meio de análise microbiológica in vitro. Onze pilares não indexados e 11 pilares indexados foram selecionados e conectados aos seus respectivos implantes com um torque de 20 N, de acordo com a recomendação do fabricante. A análise microbiológica foi realizada utilizando colônias de Escherichia coli retirados diretamente a partir de uma placa de cultura para o componente protético. Para os grupos de controle, foi utilizado um pilar-implante não contaminado de cada grupo (controle negativo) e um implante contaminado sem pilar (controle positivo). Os espécimes foram imersos em caldo BHI e mantidos numa incubadora a 37 °C durante 14 dias, para monitorar o desenvolvimento de contaminação bacteriana. Os resultados revelaram que 36,4% (n=4) dos componentes indexados e 90,9% (n=10) dos componentes não indexados obtiveram infiltração bacteriana, com diferença significativa entre os grupos (p=0,0237). Como conclusão, os dois componentes cônicos não conseguiram proporcionar uma vedação adequada contra infiltração bacteriana, embora os componentes do tipo indexados mostrassem uma vedação superior, quando comparados com componentes não indexados.
Assuntos
Implantes Dentários/microbiologia , Projeto do Implante Dentário-Pivô , Escherichia coli/isolamento & purificaçãoRESUMO
Mucograft(r) is a resorbing porcine matrix composed of type I and type III collagen, used for soft tissue augmentation in guided tissue bony regeneration procedures. This in vitro study aimed to evaluate the biological behavior of Mucograft(r) in human gingival fibroblasts, as well as the ability of the matrix to induce production of extracellular matrix. Six resorbing Mucograft(r) matrices (MCG) were cut into 3 x 2 mm rectangles and 5 x 5 mm squares and were placed in 96- and 24-well plates, respectively. The control group (CTRL) consisted of cells plated on polystyrene without the MCG. After one, two, three and seven days, cell proliferation and viability were assessed using the Trypan exclusion method and MTT test, respectively. Type III collagen (COL 3A1) and vimentin (VIM) expression were also evaluated at 10 and 14 days, using Western blotting. Statistical analysis, using ANOVA with post hoc Bonferroni test, revealed that human gingival fibroblasts from MCG showed similar results (p>0.05) for proliferation and viability as the cells cultured on CTRL. After 14 days, a significant decrease in COL 3A1 expression (p<0.05) was observed when cultured with the MCG. VIM expression showed no significant difference at any time period (p>0.05). Although no increase in extracellular matrix secretion was observed in this in vitro study, Mucograft(r) presented cellular compatibility, being an option for a scaffold whenever it is required.
Resumo A Mucograft(r) é uma matriz reabsorvível, de origem suína, composta de colágenos do tipo I e III, utilizada para aumento de tecido mole em regeneração óssea guiada. Este estudo in vitro teve como objetivo avaliar o comportamento biológico da Mucograft(r), em fibroblastos gengivais humanos, bem como a indução da síntese de matriz extracelular. Seis matrizes reabsorvíveis de Mucograft(r) (MCG) foram cortadas em retângulos e quadrados medindo 3 x 2 mm e 5 x 5 mm e alocadas em placas de 96 e 24 poços, respectivamente. O grupo controle (CTRL) consistiu no plaqueamento celular em poliestireno, sem MCG. Após um, dois, três e sete dias, a proliferação e a viabilidade celular foram avaliadas utilizando o corante vital azul de Trypan e o teste MTT, respectivamente. Além disso, a expressão de colágeno tipo III (COL 3A1) e vimentina (VIM) foi avaliada após 10 e 14 dias, por meio de Western-blotting. Após análise estatística (Anova e pós teste de Bonferroni), pode-se observar que os fibroblastos gengivais humanos, cultivados sobre MCG, apresentaram proliferação e viabilidade semelhantes em comparação às células que foram cultivadas apenas no poliestireno (CTRL). Após 14 dias, notou-se uma diminuição significativa da expressão de COL 3A1 (p<0,05) quando as células foram cultivadas sobre a MCG. A expressão da VIM não mostrou diferença significativa em nenhum dos períodos estudados (p>0,05). No presente estudo in vitro pode-se concluir que apesar de não ter sido observado aumento da síntese de matriz extracelular, a Mucograft(r) apresentou compatibilidade celular, sendo uma opção de biomaterial em casos que o arcabouço é necessário.